Системная красная волчанка (СКВ) представляет собой системной аутоиммунное заболевание, характеризующееся гиперпродукцией широкого спектра органоспецифических аутоантител к различным компонентам ядра и образованием иммунных комплексов, вызывающих иммуновоспалительное повреждение внутренних органов. При СКВ иммунный ответ направлен в основном направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т.е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. В настоящее время описаны около 200 разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. В связи с этим первым шагом лабораторной диагностики СКВ является исследование на наличие АНФ и ЭНА.
Антитела к нуклеосомам.
Свободные нуклеосомы рассматриваются в качестве основного иммуногена, стимулирующего иммунные ответ Т- и В-клеток при СКВ. Вероятно, источником свободных нуклеосом при этом заболевании являются эпителиоциты и лимфоциты, которые подвергаются избыточному апоптозу. Нуклеосомы, представляют собой структурные единицы хроматина, состоящие из ДНК и гистоновых белков. Вокруг ядра нуклеосомы, состоящего из белков гистонов Н2А, Н2В, Н3 и Н4, обернуто 146 пар нуклеотидов ДНК, что составляет два с половиной витка. Между нуклеосомами находится промежуток из линейной ДНК и гистона Н1. Такая структура укладки ДНК позволяет компактно упаковать генетический материал в составе хромосом клетки. Значительное количество свободных нуклеосом может образоваться при программированной клеточной гибели (апоптозе).
Совокупная частота выявления антитела к нуклеосомам при СКВ составляет 60-90%, причем антитела к нуклеосомам отмечаются несколько чаще, чем антитела к ДНК (40-50%), поэтому могут позволить диагностировать СКВ у пациентов без антител к двуспиральной ДНК. Антитела к нуклеосомам отмечаются у 40-70% пациентов с классической красной волчанкой с поражением кожи и внутренних органов и у 80% больных СКВ с поражением почек. Редко они обнаруживаются у больных с синдромом Шегрена (5-8%), и с той же частотой при смешанном заболевании соединительной ткани. Антитела к нуклеосомам не выявляется у больных с другими заболеваниями соединительной ткани и здоровых доноров, что позволяет отнести нуклеосомные антитела в разряд высоко специфических маркеров СКВ. За счет перекрестной реакции с антителами к гистонам антитела к нуклеосомам могут использоваться в диагностике лекарственной волчанки. Антитела к нуклеосомам являются одними из первых аутоантител, формирующихся в организме в ходе развития СКВ. Антитела к нуклеосомам, как и антитела к дсДНК, могут играть большое значение в патогенезе поражения почек при волчаночном нефрите. Нуклеосомы, находящиеся в крови, обладают высокой аффинностью к гепаран-сульфату базальной мембране клубочков и способны откладываться на ней, приводя к связыванию антител к нуклеосомам и антител к дсДНК, с последующим развитием гломерулонефрита. Для выявления антител к нуклеосомам используется иммуноферментный тест (ИФА) второго поколения, основным отличием которого является применение высокоочищенных нуклеосом, что обеспечивает специфичность определения данных анутоантител для диагностики СКВ превышающую 95%.
Антитела к двуспиральной ДНК.
Антитела к двуспиральной ДНК (дсДНК) реагируют с фосфорибозным скелетом молекул эукариотической ДНК. Связывание антител с ДНК не зависит от ее конформации и нуклеотидной последовательности. In vivo основной мишенью антител к дсДНК являются фрагменты ДНК образующейся в ходе апоптоза эпителиальных клеток и лимфоцитов. Большие количества дсДНК, ассоциированной с нуклеосомами, образуются при системной красной волчанки (СКВ) и могут быть обнаружены в периферической крови пациентов. Именно дсДНК, ассоциированная с нуклеосомами (дсДНК-NcX), является основным антигеном антинуклеарных антител при системной красной волчанке и принимает участие в поражении почек при этом заболевании. Титры антител к дсДНК тесно коррелируют с концентрацией IgG-содержащих иммунными комплексами в сыворотке крови больных СКВ. Исследования элюатов из почечных клубочков больных СКВ, указывают на большую концентрацию антител к дсДНК в элюате по сравнению с их концентрацией в сыворотке. В ходе развития волчаночного нефрита фрагменты ДНК и нуклеосомы связываются с базальной мембраной почек. Реакция между антителами к дсДНК со своим антигеном приводит к формированию иммунных комплексов insitu, которые нарушают функции подоцитов, базальной мембраны и приводят к иммунокомплексному повреждению клубочка с выраженной активацией комплемента и потреблением сывороточных факторов С3 и С4.
Для обеспечения высокой специфичности обследования в нашей лаборатории используется тест второго поколения для выявления антител к комплексу дсДНК-нуклеосомы. Использование более совершенной технологии позволяет исключить перекрестную реакцию антител с односпиральной ДНК. Использование положительно-заряженных гистоновых белков нуклеосом для сенсибилизации ИФА планшетов обеспечивает сохранение нативной структуры молекулы ДНК. Тесты второго поколения для выявления дсДНК в комплексе с нуклеосомами обеспечивают чувствительность более 60% при специфичности 95-98%.
При системной красной волчанке антитела к дсДНК могут быть обнаружены у 50-70% больных, и характеризуются гомогенным типом свечения ядра НЕр-2 клеток при выявлении АНФ. Антитела к дсДНК входят в состав 10-го критерия СКВ Американского Колледжа Ревматологов, совместно с обнаружением антител к Sm антигену и определением антител к кардиолипину.
У большинства больных с активными почечными формами СКВ отмечаются антитела к дсДНК. Для определения риска поражения почек рекомендуется регулярное обследование всех больных СКВ для наблюдениями за содержанием антител к дсДНК и динамикой С3 и С4 факторов комплемента каждые 3-6 месяцев. Имеется прямая корреляция между нарастанием титра антител к дсДНК, выраженностью гипокомплементемии и тяжестью волчаночного нефрита. Нарастание титра антител к дсДНК (удвоение титра в течении 3 месяцев) и гипокомплементемия предшествует развитию гематурии и протеинурии в 90% наблюдений. Биопсии почек у таких больных почти всегда выявляют наличие значительных иммунноопосредованных изменений, даже при отсутствии клинических проявлений обострения. Увеличение титра анти-дсДНК антител в течении нескольких недель является предвестником вспышки СКВ, что может быть установлено при ежемесячном мониторинге их концентрации в сыворотке крови. Раннее распознавание этих состояний наряду с активной стероидной/иммуносупрессивной терапией играет значимую роль в ведении больных с поражением почек при СКВ. Рекомендуется профилактическая терапия больных с нарастание титра антител к дсДНК вплоть до его снижения и восстановления нормальных концентраций факторов комплемента в сыворотке крови больных.